Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的步骤中逐渐扩展

从第一次注意到胰岛自身毒素到注意到1标准型癌症临床研究病症的十分困难所部在青少年一时期就有很好的叙述，多个胰岛自身毒素阳性的青少年里有70%在毒素转换后10年内患上癌症，而随访15年的青少年这一比例减少到84%。相比之下，%临床研究1标准型癌症一半以上的标准型1标准型癌症的发作机制还并未获得充分的研究工作。

越来越多的人开始用于分期系统来定义1标准型癌症的十分困难：个体在注意到多种胰岛自身毒素时离开第1下一阶段，注意到血糖反常时离开第2下一阶段，注意到病症时离开第3下一阶段。一些多发胰岛自身毒素阳性的个体，在1期和2期，十分困难较慢速，并的发展为发作的1标准型癌症。我们早先叙述了一两组在首次检测到多种胰岛自身毒素取样后至少10年无癌症的极慢速十分困难者，这两组高血压人数少，但特征相当明确。随后，我们发现胰岛自身抗原特异性CD8+T细胞核反应在十分困难很慢速的高血压里必需不共存，但在早先发作和仍然共存的癌症高血压里很很难检测到。这似乎表明，与十分困难高血压相比，这些高血压胃溃疡反应的调节强化。

早期研究工作表明，尽管调节性T细胞核(Treg)数量正常，但癌症高血压共存一些新功能缺陷，其里包括对IL-2的反应能力增加。此外，癌症高血压里的畸变CD4+T细胞核似乎对调节更具抵抗性，表现为畸变T细胞核的消除消退，自然环境转化成的Treg和体外转化成的游离Treg，以及抗原历程的CD4+T细胞核里IL-2反应消退。本研究工作的目的是叙述了CD4+调节性T细胞核(Treg)在群集极很慢速十分困难者里的特征，他们的平均平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX研究工作是一项以成年人为基础的侧向研究工作，在21岁以下确诊的高血压亲属里检查1标准型癌症的危险因素。我们早先叙述了仍然很慢速十分困难者的特征，他们保证多重胰岛自身毒素阳性超过10年，但并未注意到癌症的临床研究病症，慢速性或非顺利进行性胃溃疡。随后，10名继续保证无癌症并不想提供大量体内取样的很慢速十分困难者纳入T和B细胞核新功能数据分析。在目前的研究工作里，8名慢速十分困难者(SP两组)，里位平均年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的胰岛自身毒素阳性。所有的参与者都处于1标准型癌症十分困难的1期，尽管一些人随后失去了胰岛自身毒素对某些抗原的阳性反应，然而，一名高血压仍未处于2期至少6年，但并未注意到临床研究病症，一名高血压被临床研究为癌症，该受试者72岁，在采集实验取样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据数据分析里对该NAD顺利进行了分开风险评估。分离外周血单个核细胞核(PBMCs)，采用多参数流式细胞核忍术和T细胞核消除试验性风险评估NAD里Treg的基频、表标准型和新功能。用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴别、表征和回归)顺利进行无都由聚类数据分析，风险评估Treg表标准型。

结果：与身心健康NAD相比，来自慢速十分困难体的遗忘CD4+T细胞核的都由聚类标示出，抑制的遗忘CD4+ Treg基频减少，与糖皮质激素游离的TNFR关的细胞内(GITR)传达减少有关。一名HbA1c升高的高血压与十分困难很慢速者和匹配的相异两组相比，Treg曲谱有所完全相同。新功能仍未有，与身心健康NAD相比，来自很慢速十分困难体的Treg介导的CD4+畸变T细胞核消除明显损伤。表现为对畸变CD4+T细胞核CD25和CD134传达的消除减少。

左图1 深入的表标准型数据分析标示出，CD4+Treg亚标准型在慢速十分困难队列里减少。由FlowSOM生成的Treg室，组织起来在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞核上。根据标明物传达鉴别出10个元簇:遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)用于9个完全相同Treg标明生成的10个元簇的MST。每个节点代表一个集群(100个集群)，更大的元集群(10个元集群)在节点两组远处装裱。每个节点里的饼左图暗示单个标明的传达分级。(b)每个元聚类的热左图，以标示出结构上标明传达。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)生成左图，以及FlowSOM鉴别的每个元簇的孔洞。(e-l)相较稀土元素为每个metacluster罐3](稀土元素> 0.05%)确切为HD和SP两组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T细胞核(l)。绿色圆点代表理应SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 用于CITRUS的系统结构猜测，Treg基频的减少是十分困难很慢速的标志。分级门控(a - f)和大豆数据分析(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞核上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l个体的代表性左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达顺利进行分离，模拟FlowSOM个体。(b) HD(黑斑)和SP(蓝点)两组以及NADSP 606(绿色)里CD25+ cd127的基频汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控侄集的罐3];(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)棉花簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达风力上色，箭头引人注目的簇被鉴别为SP和HD队列之间的完全相同。(j)罐3]标示出了在SP(蓝点)和HD(灰点)两组里，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相较稀土元素(比例)。(k)直方左图标示出每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标明相较传达与历史背景传达(粉红色);上列，闪存Treg_3;下面一行，闪存Treg_4。历史背景与所有其他簇里标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

左图3 与身心健康献血者相比，十分困难很慢速者遗忘treg的GITR减少。每个遗忘CD4+T细胞核元簇(遗忘T细胞核_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T细胞核;HLA-DR + GITR +遗忘T细胞核;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检测每个传达标明的变异。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的传达热左图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇里所有HD(黄色)、所有SP(粉红色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR传达串联，标示出直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(绿色)所有NAD包括，p< 0.05(粉红色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR传达，从分级门控，从所有HD(黄色)、所有SP(粉红色)和SP 606(绿色)串联，标示出直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

左图4 来自很慢速十分困难的CD4+ treg细胞核操控畸变CD4+T细胞核的能力增加。SP两组用粉红色的本站和圆点暗示，HD两组用红色的本站和圆点暗示，绿色的本站/圆点暗示NADsp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被标明为CFSE, Treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞核，养成3同一天顺利进行流式细胞核忍术检测。(a-d)与CD4+；也者相较应的treg养成(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD；也者养成。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE消除百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除百份。用于阳性相异(抑制的响应细胞核不含treg)计算消除百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 畸变CD4+T细胞核对很慢速十分困难的T细胞核还原的消除更敏感。SP两组用粉红色的本站和圆点暗示，HD两组用红色的本站和圆点暗示，绿色的本站/圆点暗示NADsp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞核顺利进行分选。CD4+CD25−(；也者)被cfsel标明，treg按观察的比例滴定。用抗CD3 /28微珠还原细胞核，养成3同一天顺利进行流式细胞核忍术(CD25反染)和细胞核因侄数据分析。HD Treg与HD、SP或sp606；也者共同养成。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE消除百分所部(b)。(c,d) CD25消除百分所部(c)和CD134消除百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成里的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差数据分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们证明了的结论是，来自很慢速十分困难侄的还原遗忘CD4+Treg在GITR传达里获得了适配和多样化，强调了进一步研究工作Treg在1标准型癌症风险个体里的异质性的全面性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28